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STED用于疟疾研究:裂殖子侵袭红细胞的STED纳米显微镜。 3D STED图像显示RON4(品红色)与蛋白质PfRh5(左,绿色),PfRipr(中,绿色),PfCyRPA(右,绿色)的重叠。 DAPI的核染色显示为蓝色,而红细胞膜显示为灰色。比例尺:1 µm。图片提供:澳大利亚的Walter and Eliza Hall医学研究所的Jennifer Volz,Alan Cowman和德国的EMBL的Marko Lampe。

纳米显微镜继续革新亚细胞结构和动力学的研究

2014年诺贝尔化学奖被授予“超分辨荧光显微镜技术的发展”。这项开创性的工作将光学显微镜带入了超越衍射极限的荧光成像新时代,使科学家能够观察纳米级的分子。时至今日,纳米显微镜仍在继续革新亚细胞结构和动力学的研究。

STED on 斯特拉里斯:生命科学的超分辨率

结合STELLARIS平台,STED是一种功能强大且用途广泛的模式,可为您的研究提供最先进的多色,深层和活细胞纳米检查结果。

  • τ-STED通过实现要求苛刻的超分辨率应用以及柔和的活细胞成像,快速采集和出色的图像质量,从而推动了纳米技术的发展。
  • 得益于快速白光激光(WLL)激发,高速共振扫描以及STELLARIS新型Power HyD检测器系列的出色动态范围,该技术可实现最快的灵活纳米技术。
  • 多达3条STED线(592、660和775 nm)与高端STED专用物镜相结合,为深层和活细胞应用打开了可见光的全部光谱范围。
  • 快速自动光束对准,以确保稳定性和可靠性,保护样品免受不必要的光照射。
  • 借助全新的ImageCompass用户界面的智能,从共焦到STED的速度很快,而且只需数秒钟。
STED免疫学:悬浮液中的活T细胞。共焦和STED堆栈的3D重建。图片提供:英国牛津大学Weatherall分子医学研究所MRC人类免疫学部门的Marco Fritsche,Mathias Clausen和Christian Eggeling。

τ-STED:纳米显微镜与终生相遇

τ-STED由Leica Microsystems独家提供,为要求苛刻的应用提供了纳米技术。这要归功于STED,超快速Power HyD检测器系列和FALCON提供的FLIM的独特结合。

τ-STED可以识别来自STED过程的信号,并以新颖的方式利用荧光寿命将其与背景区分开。它对荧光寿命梯度进行解码,以在低得多的光剂量下提供所需的分辨率,并使分辨率超过传统的STED。结果是获得分辨率高于30 nm(横向)和100 nm(轴向)的高质量图像。* 

τ-STED适用于2D和3D多色STED,包括活样品和固定样品。较低的激发光和STED光剂量可以保护您的样品,延长延时实验并实现大体积成像。借助FALCON,原始数据始终可用于验证和定量。

*取决于样品和荧光团。 

STED用于发育生物学:果蝇胚胎全制剂中RNA的单分子原位杂交(smFISH)。探针直接标记(无信号放大)。顶部:三色t-STED 775捕获来自hbCalFluor 610(青色),gt Quasar 670(绿色),eve Quasar 705(品红色)的信号。下图:果蝇胚胎制备的共聚焦概述。样品礼貌:英国曼彻斯特大学的汤姆·佩蒂尼(Tom Pettini)。 

在保护样品的同时提高分辨率

τ-STED使用每个STED实验中包含的寿命信息来消除背景  并实时绘制荧光团的STED反应。访问此信息可让您提高图像质量(表示为信噪比)和分辨率,而不必诉诸苛刻的成像条件。

τ-STED受益于STED平台的灵活性:WLL激发和STED效应在整个光谱范围内均已针对所选荧光团进行了优化。

GATTA-Bead R 23 nm的τ-STED775成像。比例尺:1um。

在低光剂量下获得所需的超分辨率和质量

当您为STED实验寻找低照度策略时,有一个关键问题:低光有多低?答案远非平凡和普遍固定的值,因为如果您考虑这一点,则取决于样品,标签和应用。

我们不会保证任意减少与您的实验无关的光剂量。相反,我们可以向您显示τ-STED大大降低了STED的光剂量和样品中的激发。 τ-STED消除了背景并达到了分辨率,否则就需要明显更高的补偿剂量和定量功能的损失。

COS7细胞上的τ-STED660对核孔(NUP)进行了免疫染色。一抗可识别核孔篮中的几种蛋白质,因此可观察到点状结构。只有2%的STED光能显示出大量的附加细节。
共聚焦
τ-STED

用于肾脏疾病研究的STED:未染色的小鼠肾脏切片的2D STED(上图)和3D STED(下图)的两种颜色成像,对Synaptopodin(绿色)和nephrin(洋红色)进行了免疫染色。样品礼貌:汉堡大学埃彭多夫分校的Victor Puelles,Milagros Wong和Jan Czogalla。

τ-STED提供全方位的光保护

τ-STED适用于多色应用。您可以在光谱的红色区域使用最好的染料,绿色使用荧光蛋白,或者在橙色使用新的荧光探针。 斯特拉里斯上的STED配备了带有AOBS的WLL,可在需要时激发您的样品,使您能够选择STED 775、592或我们独有的660激光线。

温和的纳米显微镜可用于延时实验

较低的激发光和STED光剂量可转化为对标本的保护,从而可以进行更长的延时实验(更多帧)或更大体积的成像,而无需牺牲空间分辨率。

稳定表达LifeAct-mNeonGreen的哺乳动物细胞上的温和活细胞τ-STED592。比例尺:5mm。游戏中时光倒流显示230帧@ 1 fps。样品礼貌:瑞士伯尔尼大学的Max Heydasch。

多色STED纳米显微镜

覆盖可见光的整个光谱

多色应用程序允许访问有关各种结构之间关系的详细信息。共定位研究通常使用STED进行。 STED在592、660和775 nm处的多条STED激光线覆盖了可见光的整个光谱,并可以访问许多适用的荧光团。

更多的颜色与众不同!

白光激光器,AOBS 以及可调节的P​​ower HyD检测器系列可协同实现对任何种类的荧光团组合的成像,并为您的多色实验提供最大的灵活性。

STED对我而言意味着:看到基本细节!

史蒂芬·西格里斯特教授,FU柏林,德国

Cos 7细胞的三色STED成像,分别用抗NUP153(绿色),TOM20(品红色)和SiR-肌动蛋白(灰色)的抗体染色。共聚焦(顶部)和STED(底部)。比例尺:2μm。
样品提供:瑞士苏黎世大学ZMB的Urs Ziegler和Jana Doehner。

先进的光学技术助力纳米显微镜

当涉及到纳米显微镜的分辨率时,从最佳光学器件入手至关重要。我们的STED WHITE类物镜的色彩校正可确保在整个可见光谱范围内在z轴上激发和STED PSF的最佳重叠。

我们开发了三种STED专业物镜,用于日常,深层和活细胞纳米检查。

在我们的STED WHITE镜头中,STED WHITE 100x油镜可提供最高的数值孔径(NA)和分辨率,并且在标准固定样本方面表现出色。对于深层STED纳米显微镜实验,STED WHITE 93x甘油物镜是首选。电动校正环可快速准确地适应2D和3D的玻璃厚度,温度变化和样品不均匀性。 

STED WHITE 86x Water镜头专用于水基实验。 motCORR技术使该镜头在活细胞和STED-FCS应用中成为强大的伴侣。

93x甘油镜是必须的,每个人都应该拥有!

日本理化学研究所定量生物学中心冈田靖 Japan 

STED WHITE STED成像专用镜头。上图:STED WHITE镜头的色差。用灰色虚线表示的景深。底部:配备motCORR技术的STED WHITE油,甘油和水镜片。

STED三维

您可以选择最佳横向分辨率,最佳轴向分辨率或两者之间的任意一种以获得最佳结果。超薄光学部分可显示未知细节。 STED与STELLARIS的强大功能相结合,使您可以将显微镜在各个维度上的分辨率与问题和标本相匹配。

在STED成像中添加三维尺寸和附加的STED线使我们能够看到以前看不到的东西。

Timo Zimmermann博士,西班牙巴塞罗那基因组调控中心

STED用于肾脏疾病研究:3D STED 775肾小球深部显微术在清除的肾组织中进行了肾素免疫染色。比例尺:10μm,z深度颜色编码。样品礼貌:瑞典斯德哥尔摩KTH的DavidUnnersjöJess。

选择您的分辨率

通过将光线分配到两个STED路径,可以实现分辨率的提高:经典的涡旋甜甜圈可实现最佳横向分辨率,而z甜甜圈可实现最佳轴向分辨率。还可以针对最小焦距进行优化。

使用STED FCS研究分子动力学

STED提供了一个强大的工具,可以将观察区域的大小连续调整到纳米级。因此,即使在更高浓度下,STED-FCS(荧光相关光谱法)也报告了分子的扩散时间,浓度和结合常数(>100 nM),而不是共焦FCS方法所能达到的效果。

STED-FCS可以与荧光寿命成像(FLIM)和相关的互相关技术(STED-FLCS,STED-FLCCS)结合使用,从而能够研究荧光光谱可能重叠的不同分子。

对用KK114制备的脂质双层进行STED校准。将STED强度增加(0%,10%,20%,50%和100%)时获得的自相关曲线归一化为1μs。自相关曲线的偏移表明STED的有效观测量减少了。由英国牛津大学的Christian Eggeling提供。

STED的软件解决方案–了解您的解决方案

斯特拉里斯上的STED已完全集成到Leica直观的LAS X软件平台中,从而确保了易用性和快速的用户培训。由我们全新的ImageCompass用户界面提供支持的智能指南可优化设置,以实现快速共焦和τ-STED采集以及2D可视化& 3D.

我们的智能STED自动对准功能只需单击一下即可完成,并保护您的样品免受激光照射。强大的LAS X Navigator软件可生成快速的大面积概览图像,以提供上下文和快速的信息。 确定区域,以进行更详细的后续STED检查。

斯特拉里斯上STED的新ImageCompass用户界面。

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