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讲解

显微手术简介

用于显微镜和阵列断层扫描(AT)的生物标本和材料的超薄切片

在研究江苏体彩时,为了以纳米级的分辨率可视化其精细结构,通常使用电子显微镜。有2种类型:扫描电子显微镜( 扫描电镜 )可以对江苏体彩表面或透射电子显微镜( 透射电镜 ),这需要非常薄的电子透明江苏体彩。因此,为了使用电子显微镜对江苏体彩内部的精细结构成像,解决方案是将其制成非常薄的切片。被称为超薄切片术的江苏体彩制备方法可以产生极少伪影的超薄切片(20至150 nm厚)。在切片过程中,从其上切下切片的江苏体彩块表面始终保持平坦而笔直的表面,可通过以下方法进行检查: 扫描电镜 。当切片以阵列成像时,则可以重建江苏体彩的3D图像。这种方法称为阵列层析成像(AT)。超薄切片术及其在AT中的应用概述如下。

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Ultramicrotomy

超薄切片术主要用作透射电子显微镜的江苏体彩制备方法( 透射电镜 )。它使江苏体彩的内部精细结构得以可视化并以纳米级分辨率进行分析。它可以快速,干净地生产出超薄的江苏体彩切片。超薄切片术的一个主要优势是切片内电子透明区域的大小和均匀性以及切片的生产速度。

超显微术可用于多种类型的江苏体彩,包括生物江苏体彩和工业材料,例如生物江苏体彩。聚合物(橡胶和塑料)以及易延展,坚硬或易碎的材料(金属或陶瓷)。还有其他制备这些江苏体彩薄片的技术,例如聚焦离子束( FIB )铣削,离子蚀刻,三脚架抛光和电化学处理,但超薄切片术在速度和清洁度方面具有优势。

阵列层析成像(AT)是用于细胞和蛋白质结构分析的高分辨率3D图像重建方法。它是使用扫描电子显微镜( 扫描电镜 )或光学显微镜( LM )成像的超薄树脂嵌入式连续切片的有序阵列。 AT允许定量,体积结构分析以及细胞和蛋白质结构的可视化。它比传统的共聚焦显微镜具有更好的横向和空间分辨率。另外,可以通过对生物样本进行部分自动化检查来实现更高的通量。

超薄切片原理

对于 透射电镜 观察,以及使用阵列层析成像的最佳3D重建,超薄,有序截面是先决条件。超薄切片机 电磁 UC7徕卡微系统的制造商可以生产这种超薄江苏体彩切片(20至150 nm厚)。

为了在透射电子显微镜中形成江苏体彩的图像,电子必须穿透江苏体彩而速度没有任何重大损失。江苏体彩对电子辐射的渗透性部分取决于其质量和厚度(厚度×密度),部分取决于电子显微镜的加速电压。样本吸收的电子会导致热量积聚,从而在物体中形成伪影。

用超薄切片机切片时,将江苏体彩插入安装在特殊轴承上的臂中,该臂执行电动垂直切割运动。切下切片并缩回标本臂后,非常精确的机电进给将江苏体彩稍微向前移动一段与所需切片厚度相对应的设定距离。切片是通过江苏体彩在固定玻璃或金刚石刀的极其锋利的刀片上垂直移动来进行的。直接从刀片上取下这些部分非常困难,因为它们太薄了。因此,在切片过程之后,它们是从水浴表面收集的(对于冷冻切片,则是借助微操纵器的帮助)。然后可以进行进一步的准备工作,然后再进行电子显微镜检查( 电磁 )。

阵列层析成像的标本制备

要准备用于AT的软生物标本,需要执行几个步骤。这些步骤包括:

  • 组织固定
  • 江苏体彩提取和树脂包埋
  • 连续切片和切片色带收集,形成切片阵列
  • 如果需要,对切片进行染色以进行成像。

然后用 扫描电镜 要么 LM (通常是荧光)。然后,将阵列中的剖面图像合并在一起,以进行3D图像重建和分析。

对于许多超薄切片机,AT江苏体彩制备需要几个耗时且繁琐的手动步骤。先进的超薄切片机,例如 ARTOS 3D 徕卡显微系统公司的超薄切片机可通过自动进行标本切片并最大程度地缩短对齐标本所需的时间来加快准备过程。 扫描电镜 要么 LM 成像。

有关超薄切片和断层扫描的更多信息,请参阅下面显示的相关文章。

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