Introduction
宽视野显微镜的特征在于整个标本的照明,并且与 共聚焦显微镜 只有一点点被照亮的地方它的变体,尤其是宽视野荧光显微镜,是生命科学中应用最广泛的技术之一。例如检测各种 荧光标记 固定或活着的标本中的蛋白可以提供对许多生物过程(如人类免疫系统)的洞察力。
人体在微生物入侵时会表现出先天性和适应性免疫反应。随着时间的流逝,适应性反应会产生高度特异性的反应,而先天性反应会立即对病原体上发现的特殊结构产生反应。它们被称为病原体相关分子模式(PAMP)。脂多糖(LPS)是革兰氏阴性细菌江苏体彩壁特有的,是这种模式的典型例子。 LPS与人类江苏体彩表面的一种特殊受体结合,即toll样受体4(TLR4)。 一旦结合,它可以触发江苏体彩内过程,最终产生称为江苏体彩因子的促炎蛋白(图1)。

江苏体彩内过程中的一个步骤是蛋白NF-κB从江苏体彩质转移到江苏体彩核中。 NF-κB作为转录因子发挥作用,支持相关江苏体彩因子基因的转录。此后产生的江苏体彩因子促使白江苏体彩(白江苏体彩)释放可以杀死细菌和病毒的活性氧(ROS)和活性氮(RNS)。不幸的是,ROS / RNS还会引起附带损害,并且可能对江苏体彩本身产生负面影响。受ROS / RNS损伤的组织江苏体彩释放出所谓的损伤相关分子模式(DAMP),它们本身可以触发TLR,从而再次启动整个过程并导致慢性炎症。这种自动放大的通行费样受体自由基循环(TLR自由基循环)可能与多种疾病有关,例如帕金森氏病,中风,抑郁症,(自身)免疫疾病或慢性阻塞性肺疾病(COPD)。一些 [1,2].
除了上述通过DAMP进行的内在活化外,还可能存在其他过程中产生的物质开始循环的可能性。例子是促炎江苏体彩因子,例如肿瘤坏死因子α(TNFα),ROS,例如H2O2 由进一步的江苏体彩过程产生,并产生自由基诱导辐射。
可以使用倒置研究显微镜来弄清炎症的分子过程。本文介绍了广角镜对我们团队的意义。最初,我们考虑购买共聚焦激光扫描显微镜。而是将宽视野荧光显微镜与 去卷积 之所以选择Google,是出于实际原因,例如,对于仅在有限时间段内加入该小组的学生来说,培训时间短。此外,宽视野荧光显微镜具有非常好的活江苏体彩成像能力,并施加了相对较低的光强度,从而降低了江苏体彩压力。
配备了各种荧光滤光镜立方体,专用物镜,快速滤光轮,气候控制和便捷的成像软件的宽视场显微镜可以为TLR自由基循环的许多方面提供照明。从普通的明场显微镜到免疫荧光实验,再到活江苏体彩和FURA成像,我们可以研究重要的现象,例如动物体内受影响组织的命运,LPS触发TLR4以及随后NF-κB易位至江苏体彩核和 2+ 炎症反应。
材料和方法
江苏体彩培养。 为了对NF-κB进行免疫荧光成像,使用了稳定转染了人TLR4,MD-2和CD14的HeLa江苏体彩。将江苏体彩在补充有10%的DMEM(Dulbecco的改良Eagle培养基)中培养