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校正共焦采集以优化通过敏化发射的荧光共振能量转移成像

荧光共振能量转移的成像(烦恼合适的荧光团之间的)越来越多地用于研究具有高时空分辨率的细胞过程。绿色荧光蛋白的遗传编码青色(CFP)和黄色(YFP)变体已成为细胞生物学中最流行的供体和受体对。 烦恼 这些荧光团之间的差异可以通过检测敏化发射来成像。只要进行了适当的校正,就可以激发CFP并检测到转移作为YFP的发射的这项技术灵敏,快速且简单。在这项研究中,通过共聚焦显微镜对CFP和YFP之间敏化发射的检测进行了优化。证明这 烦恼 这对人最喜欢430 纳米我们确定了共聚焦误差和变异性的主要来源 烦恼 采集包括色像差和激发源的不稳定性。我们证明了一种采用在线校正测量的新颖校正算法可产生可靠的 烦恼 效率,还显示了如何将其他错误源的影响最小化。

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van Rheenen J,Langeslag M和Jalink K:
校正共焦采集以优化通过敏化发射的荧光共振能量转移成像

Biophys J.86(4):2517-29(2004); PMCID:PMC1304099