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荧光寿命成像显微镜(FLIM)的发展及其与功能成像的相关性

阿玛西·皮里亚萨米(Ammasi Periasamy)教授访谈

弗吉尼亚大学凯克细胞成像中心主任Ammasi Periasamy教授在德国曼海姆举行的Leica Microsystems Meets Science 2019期间接受了功能成像产品经理Giulia Ossato博士的采访。他们就荧光寿命成像显微镜进行了令人振奋的聊天(电影)。的技术发展 电影 并讨论了其在研究氧化还原状态方面与功能成像的相关性。佩里亚萨米教授还谈到了他对活细胞代谢和功能障碍的研究。他指出,过去几十年的主要发展之一是应用寿命对比技术来收集有关分子相互作用和功能的信息。他主要建议改善 电影 提高了收集速度和数据的实时显示,因此可以更轻松地研究纳秒级时间范围内的分子动力学。他结束采访时说,许多生物学实验室使用这种方法只是时间问题。 电影 研究蛋白质间相互作用的技术。 Periasamy教授还认为SP8 FALCON满足通过荧光寿命成像获得理想结果所需的条件。

学习更多关于 使用SP8 FALCON的FLIM.

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与Ammasi Periasamy教授就功能成像进行聊天

视频采访记录

Ossato博士: 下午好,Periasamy先生,非常感谢您在这里并同意接受有关功能和荧光寿命成像的采访。上个月,亚历山德罗·埃斯波西托(英国剑桥大学医学研究委员会)发表了一生最杰出的一生影像学作家,而您名列第五,因此,恭喜!

佩里亚萨米教授: 谢谢!

Ossato博士: 您是否愿意与我们分享您在功能成像方面的一些研究?

佩里亚萨米教授: 非常感谢您邀请我!很高兴在这里谈论功能成像的使用寿命。我在使用生命周期的研究方面做了很多工作。目前,我正在使用内源性分子来测量活细胞,组织和动物中的新陈代谢以及线粒体功能障碍的荧光寿命氧化还原比。这是我目前正在研究的主要内容。

Ossato博士: 因此,所有标签都是免费的。因此,您无需任何标记或额外的标准荧光染料就能进行新陈代谢?

佩里亚萨米教授: 那是对的。 NADH,FAD和色氨酸提供自发荧光。您不必标记它。因此,这种技术对于翻译研究很有用。更重要的是,寿命是一种可以应用于此类测量的技术,因为它提供了结合和游离辅酶NADH和FAD的信息。因此,只能使用生命周期技术来区分绑定和释放的这两个函数。使用强度技术无法做到这一点。

Ossato博士: 好的,谢谢您的解释。您认为过去15年中生命成像最相关的发展是什么?

佩里亚萨米教授: 好吧,因此生命成像或多或少地始于1990年代。在此之前,寿命技术仅在化学和物理实验室中可用。我们必须考虑的重要事情是对生物学数据生命周期的解释。那就是生物学家基本上正在寻找如何将生命周期测量结果与生物学联系起来的地方。因此,这需要某种教育来教育他们终身技术可能对生物学有用。 

Ossato博士: 因此,还有助于解释数据,例如,改变寿命的分子相互作用来自何处。

佩里亚萨米教授: 没错在分子相互作用(蛋白质-蛋白质相互作用)的情况下,生命周期技术非常有用,这被称为 FRAP。因此,这被称为先进的寿命技术。

Ossato博士: 因此,最近几年有了很多发展。我们荧光寿命成像部分还缺少什么?

佩里亚萨米教授: 因此,寿命测量中仍然缺少的部分是速度以及数据分析,因为生物学是纳秒级的事件。我们可以在纳秒级时间模式下测量寿命。但是,该技术必须进步以加快数据收集速度,而且还不能光漂白。实时地,如果我们在收集寿命时显示数据分析板,则生物学家可以轻松地解释测量结果。

Ossato博士: 因此,您认为生命周期在生物学实验室中仍然占有很大的位置,借助一项新技术将有助于传播这种新的对比荧光显微镜技术。

佩里亚萨米教授: 没错寿命成像是一种非常好的对比度技术。而且不仅是对比,即使蛋白质分子相互作用,您也可以发挥动态含义。因此,这是一种动态技术,可以肯定地推进。它可以在所有生物学实验室和显微镜设备中使用,例如共聚焦。我认为FALCON系统满足该条件。但是,您仍然知道,生物学家将不得不跟上正在发生的事情。

Ossato博士: 我们需要教育他们。我们应该尽快举办一些研讨会。非常感谢您抽出宝贵的时间,今天很高兴与您交谈。

佩里亚萨米教授: 非常感谢您的宝贵时间。