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选择研究显微镜时要考虑的因素

什么是适合我的研究显微镜?本文为您简要概述了在选择光学研究显微镜时应记住的主要功能。

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一个 光学显微镜 通常是生命科学研究实验室的核心设备之一。它可以用于各种应用,这些应用揭示了许多科学问题。因此,显微镜的配置和功能对其应用范围至关重要,范围从明场到荧光显微镜再到活细胞成像。

本文简要概述了相关显微镜的功能,并总结了选择研究显微镜时应考虑的关键问题。

您使用哪种标本?

选择研究显微镜时要考虑的第一件事是要探索的标本类型。对于固定在薄载玻片上的固定样品,您可以使用 立式显微镜. 活细胞 需要显微镜的特殊特性,因为它们被保存在相对较大的位置 细胞培养 装有细胞培养基的血管。

只有倒置的配置,物镜在样品下方,聚光镜在样品上方,才有助于基本的自由空间和物镜与样品所需的接近。同时 倒置显微镜 保持对细胞的良好可及性,例如添加微操纵器。

另外,活细胞需要足够的环境才能生存。温度和CO2 浓度必须保持在一定水平。一种 气候室 与相应的控制器配合使用是完成此任务所必需的。


您如何看待?

微观样本扩展为三个维度:长度,宽度和高度。尽管某些标本(例如组织切片)仅在xy方向上成像,但还有一些其他应用也要求在z维度上进行采集。成像3D体积对于活细胞,建议使用电动物镜左轮手枪,它能够逐步引导样品聚焦。 成像软件应该能够重建单个图像以进行3D可视化。

对于活细胞,必须添加维度时间。在这种情况下,例如系统 稳定性 是另一个关键功能。由于温度变化会影响采集期间的成像系统,因此必须采取有效的对策。自动对焦调整,例如 自适应聚焦控制( 亚足联 ) 抵消这些热影响并始终找到预定义的焦点。

哪种对比方法最适合您的样品?

用显微镜研究的大多数细胞,尤其是动物细胞,没有足够的固有对比度,无法看到细节。研究人员使用 对比方法 解决此问题。鉴于 相衬 (PH)和 微分干涉对比 ( 迪克 )操纵穿过样品的光以增加对比度,也可以用 荧光染料 (免疫荧光)分别使用 荧光蛋白.

根据对比方法,显微镜需要特定的设备。例如相衬需要特殊 目标 迪克 利用某些 棱镜 必须将其切换到光路中。对于 荧光显微镜 你需要特别 过滤立方体 允许正确的光波长进入和离开样品。

光源呢?

对比方法的选择也决定了光源。常规明场显微镜的透射光照明,相衬和 迪克 可以用 卤素 要么 LED 照明。 荧光显微镜 可以通过LED照明或借助 , , 要么 汞金属卤化物 灯。

您要记录或发布结果吗?

如果要拍摄标本图像或进行活细胞成像,则需要数字 显微镜 相机 。特别是在荧光活细胞成像的情况下,建议使用灵敏的摄像头以最小化可能伤害细胞的激发光量。除了行之有效的 CCD 埃姆 如今的相机 CMOS 由于其高量子效率和采集速度,相机得以应用。有关数码显微镜相机的更多信息,请阅读文章 数码相机技术简介.

而且,大 视场 (FOV)有助于更快地找到有趣的区域并同时为更多的单元成像。现代研究显微镜具有 19毫米视野 在与19毫米sCMOS相机芯片完美匹配的相机端口上。

通常,仅拍摄标本的图像不足以拍摄图像 分析数据 您获得了。为此,易于使用 成像和分析软件 有助于获取定量数据并进行可靠的数据分析。

您是否需要厚样本中的(3D)信息?

厚样品对于显微镜检查是一个挑战。特别是在 广角镜,即同时照亮整个样品的位置,可以通过从焦点区域以外发出的其他光显着降低识别焦点对准的样品特征。

计算清算 可以帮助您获得无焦点的图像。该技术既可以应用在单个图像平面上以获得即时结果(ICC:即时计算清除),也可以与其他反卷积步骤(SVCC:小体积计算清除; LVCC:大体积计算清除)结合使用以获得更好的结果。去卷积将光子信息重新分配给它们的原点,从而在焦平面中提供所需结构的更好对比度。与传统的广角图像相比,这可以使用户更轻松地从背景中区分感兴趣的结构。

您想在显微镜上操作细胞吗?

在最近几年中,对标本的照片处理变得很流行。这意味着研究人员不仅要观察活细胞,还要借助光来操纵它们。 光漂白后的荧光恢复 ( FRAP )是有助于解开动态细胞过程的一个示例。对于这些类型的操纵技术,通常需要附加的光源,这些光源必须集成到显微镜的光路中。

这种方法并不简单。徕卡 无限端口 是一种通用解决方案,可以将其他光源耦合到显微镜的光路中,而不会影响图像质量,例如 FRAP ,光开关,烧蚀或 光遗传学。有了合适的适配器,研究人员甚至可以耦合他们自己的设备。

What is your budget?

一个重要的问题是您可以花多少钱。一些显微镜供应商提供适合特殊应用的预定义配置。但是,如果您不需要购买所有预配置的组件该怎么办?这就是为什么 免费配置 比购买预定的显微镜系统便宜。

此外,对显微镜的要求可能会随时间变化。在这种情况下,可升级系统具有某些优势。通过预定义和固定的配置,您可以发现自己受限于有限的应用程序。 可升级性 使您可以随需求的增长而自由发展。

考虑到这些要点, 模块化的 显微镜平台, 如那个 徕卡DMi8,使研究人员可以从负担得起的显微镜系统入手,该系统可以在以后升级并随其需求增长。

谁将使用显微镜?

显微镜使用者的范围可能非常不均匀。特别是在大学里,用户可以是非常有经验的或绝对的初学者。因此,由 直观的软件,例如Leica Application Suite X( LAS X ),有助于使人们快速入门并快速获取数据。例如,面向工作流程的设计,图像分析向导以及将外围设备无缝集成到系统中,可以简化您的工作。

除了宽视野研究显微镜外,立体显微镜还经常用于生命科学研究实验室。请在文章中找到更多信息"选择立体显微镜时要考虑的因素".

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