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贾第鞭毛虫-低温SEM的样品制备

徕卡EM ACE900 应用说明-生命科学研究

将100目铜网(12微米厚)浸入浓缩的贾第鞭毛虫悬浮液中,然后将其夹在两个表面刮擦的3毫米扁平铝制样品架之间。随后,将三明治转移到中间板的扩孔中(直径3.1 mm)。

在顶部添加一个50 um的隔离环,并立即用 HPM100 无需使用酒精作为同步流体的高压冷冻机。

托架三明治安装在自制的3毫米支架中 VCT100 装载站并转移到 ACE900 原型使用安装在ACE900上的VCT100穿梭机和VCT500扩展坞(通过转接板连接)。将低温阶段设置为-120°C,将支架放置在那里10分钟以达到液氮平衡。通过用压裂刀推下顶部载体使样品破裂,然后在-105°C下进行部分冷冻干燥5分钟。将样品以45°角涂有2.5 nm铂/碳层(电子束蒸发),不旋转,然后在90°下旋转4 nmC。

在第二个样品上不进行冷冻蚀刻,将其在-150°C断裂,并立即以2,5 nm Pt / C和4nm C的温度进行涂覆,角度与以前相同,不旋转。使用Leica将样品转移到Zeiss Auriga 40扫描电子显微镜中的低温台上 电磁 VCT100梭将样品保持在高真空条件下,并被冷却罩包围。使用Inlens二次电子检测器在-115°C下获取图像。

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概要

结果
使用所述设备在整个生物体中产生大而干净的骨折面。压裂后通过部分冻干暴露了超微结构的细节,如细胞器和细胞骨架成分。样品在显微镜下稳定,并成像了几个小时。