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烦恼 / 电影生物传感器和终生成像如何帮助确定锌对于人类B细胞发育的重要性

穆克塔(Mukta Deobagkar)博士访谈

在其最新研究中,Mukta Deobagkar-Lele博士研究了锌转运蛋白ZIP7在调节B细胞活性及其对人体免疫的影响中的作用。在接受来自Leica Microsystems的Luis Alvarez博士的采访时,她描述了这些研究的主要发现,这些发现发表在她最近的文章中。 自然免疫学。她还讨论了她使用SP8 FALCON进行终身成像的介绍,以及这种方式如何帮助她探索B细胞生物学和相关的免疫缺陷。

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为什么这篇论文对当今的免疫学很重要?

锌缺乏会对免疫功能和对感染的反应产生不利影响,但人们对于锌对人类免疫系统的重要性或重要性了解甚少。这篇报告 [1] 在早期B细胞发育过程中发现锌转运蛋白SLC39A / Zip7的关键作用,从而将锌稳态直接关联到免疫系统。 Anzilotti等人的这项研究。这也是临床医生和研究人员之间的合作如何增进对原发性人类免疫缺陷的遗传和分子基础的更好理解的一个很好的例子。

功能成像对您了解患者的病情有多少帮助?

使用基因编码 烦恼/电影 生物传感器,我们能够在原代B细胞中成像细胞质和ER保留的锌。这导致我们观察到Zip7的亚型突变会干扰整个细胞区室的锌稳态。功能性锌成像可用于支持以下假设:锌平衡紊乱可能会改变局部激酶/磷酸酶活性,从而影响受影响个体的细胞信号传导和免疫功能。

要使这些成像实验正常工作,您遇到了哪些挑战?您如何设法克服它们?

烦恼/电影 显微镜设置对我来说是一种全新且陌生的技术。我们的论文面临多个挑战,包括建立主要的CRISPR-Cas9 pre-B细胞培养物,在这些原代细胞中表达锌生物传感器,标准化基本成像条件,例如保持细胞存活和存活的最佳培养基和表面。为了克服这些困难,惠康人类遗传学中心和细胞成像核心部门花费了很多时间和大量同事的帮助。最后,无数次试错环节以及在显微镜下进行的深夜检查对于使这些实验正常进行至关重要。

在开始此项目之前,您对生命成像的熟悉程度如何?这些收购有多困难?

我在研讨会上听说过该技术,但以前从未使用过显微镜或软件,因此是一个完整的新手。由于每台显微镜及其专用软件通常都不同,因此学习曲线非常清晰。但是,一旦我熟悉了显微镜和软件设置,进行采集就容易得多。我在核心机构的支持下确实很有帮助,他们能够帮助设置和优化采集参数。

您会为尝试进行类似功能实验的人提供什么建议?

如果您是使用新颖和先进的显微镜工具的新手,请确保已接受了解如何最佳使用显微镜的人员的良好培训和指导。一旦您知道如何使用基本功能,就可以随时扩展界限并尝试新事物 烦恼/电影 设定。另外,正确而准确的图像采集只是一步,而实际数据分析和数字运算同样至关重要。这些需要大量的动手时间,并且数据分析是一个劳动密集且缓慢的过程。希望,随着越来越多的非专业初学者采用这项技术,将会有更多的诱因来促进用户友好和自动的图像数据分析。

您现在对设计或运行FLIM实验感觉如何?您打算更多地使用这种技术吗?

在初步分析细胞内细胞内锌后,我使用了 烦恼/电影 设置使用遗传编码的生物传感器来测量初级B细胞中小GTP酶的活性。虽然我预计我将不时需要技术援助,但我希望能够独立地设置和运行实验以及对数据进行充满信心的分析。