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如何通过激光显微切割改善DNA突变分析工作流程

癌症研究:提取未稀释的癌症组织用于DNA突变分析

DNA突变会导致蛋白质异常或功能蛋白缺失, 可能导致细胞不受控制地繁殖并变成癌。 要找到并了解特定癌症类型的潜在突变, 提取纯净的肿瘤物质极为重要。这具有挑战性 特别是在只有有限量的癌组织可用的情况下(例如小转移)。 激光显微切割 允许提取纯癌组织而无需 用健康的细胞污染样品。 DNA测序将导致 有效和可重复的结果有助于鉴定引起癌症的DNA 容易发生突变,因为不会发生污染健康细胞的掩盖现象。

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单细胞精度的DNA突变分析工作流程

徕卡的激光显微解剖系统将仅精确切割您感兴趣的细胞,从而改善您的工作流程。每个步骤都在视觉控制下,并且不会受到周围组织的污染。

LMD传单"DNA突变分析"


DNA分析工作流程-步骤

1.样品制备

通常,基于特殊膜的载片用于激光显微切割。样品制备 LMD 很简单,可以从经典的组织学准备中得出。

石蜡包埋使组织样品具有可切成薄片的结构。另外,您可以利用冷冻切片来准备幻灯片。如果有新鲜的癌组织,则应首选冷冻切片以防止核酸降解。

我们将提供 适用的LMD滑轨 为您的应用程序。

2.固色和染色

通常,可以使用石蜡切片或冷冻切片。在这里,我们将概述冻结部分的用法。

样品载玻片应固定,并在冷冻切片后立即用丙酮,乙醇或乙醇和乙酸的混合物染色。

H&E是一种常见的组织学染色,苏木精染色细胞核,曙红染色细胞质。

H&E染色适用于石蜡切片和冷冻切片。

3.可视化和ROI定义

徕卡 LMD 系统可以生成自动样本概述,可用于轻松导航到您感兴趣的区域(ROI)。

ROI可以由AVC软件模块自动识别和标记,也可以手动应用形状。 

4.激光显微切割

接下来,在视觉控制下,由激光精确地确定定义的ROI,并通过重力直接收集。视觉控制的切除可防止肿瘤物质与健康细胞混合,从而扭曲结果。通过重力收集可以使用标准的,具有成本效益的 消耗品 例如PCR管或8条管。

另外,您可以使用"Move and Cut"工具,没有任何预定义的形状。

我们提供适当的 LMD 系统根据您的需求。

5. Extraction of DNA

徕卡显微系统推荐高质量的QIAGEN试剂盒(QIAamp® DNA Micro Kit)用于制备核酸。

它们可以立即用于下游应用中,例如PCR,测序,定量,实时PCR,或者可以存储在–20°C下直至需要。

请参阅 www.qiagen.com 有关详细信息。

6. DNA突变分析

DNA突变分析是通过下一代测序(NGS)进行的。

焦磷酸测序或经典DNA Sanger测序等其他技术也适用。

典型研究领域

  • 病理学研究
  • 神经科学
  • 药物研究
  • 植物研究
  • 表观遗传学研究

参考文献

  1. Shen等人,Nature,2018,doi:10.1038 / s41586-018-0703-0
  2. Makohon-Moore等,自然,2018,doi:10.1038 / s41586-018-0481-8
  3. Untch等人,CancerRes,2018,doi:10.1158 / 0008-5472.CAN-17-1925
  4. 黄等。纳米疗法(2018)