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如何通过激光显微切割改善您的RNA分析工作流程

脑研究:单神经元切除进行RNA分析

帕金森氏病是一种常见的进行性神经退行性疾病。它与黑质中释放多巴胺的神经元的细胞死亡有关。受疾病影响的个体多巴胺释放神经元与健康个体之间的基因表达模式差异允许定义治疗的靶基因。对于RNA分析,单细胞分辨率至关重要,因为研究整个江苏体彩毫无意义。分析释放多巴胺的神经元和所有其他脑细胞的混合物会使结果失真。徕卡的 激光显微切割(LMD) 方法可让您从帕金森氏病患者的死后江苏体彩中特异性分离和分析单个多巴胺能神经元。这使得研究人员可以排除由于检查不均匀细胞群体而引起的误解。

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单细胞精度的RNA分析工作流程

徕卡的激光显微解剖系统将仅精确切割您感兴趣的细胞,从而改善您的工作流程。一切都在视觉控制下,不会被周围江苏体彩污染。

Flyer LMD RNA分析

RNA分析工作流程-步骤

1.样品制备

通常,基于特殊膜的载片用于激光显微切割。样品制备 LMD 很简单,可以从经典的江苏体彩学准备中得出。

石蜡包埋将江苏体彩样本带入可以切成薄片的结构。或者,您可以使用冷冻切片来准备幻灯片。用于RNA分析的江苏体彩通常是速冻的,例如在液氮中并随后冷冻切片。

我们将提供 适用的LMD滑轨 为您的应用程序。

2.固色和染色

甲酚紫染色通常用于神经元江苏体彩。它是一种基本染色剂,可与神经细胞质的酸性分子结合,例如富含RNA的核糖体。

甲酚紫永久性地染色切片,并且适用于石蜡切片和冷冻切片以及随后的RNA制备。

除了甲酚紫之外,还可以使用其他污渍(例如甲苯胺蓝)。

3.可视化和投资回报率

徕卡 LMD 系统可以为您生成自动样本概览,可用于轻松导航到您感兴趣的区域(ROI)。 

您的投资回报率多巴胺能神经元可以通过AVC软件模块自动识别和标记,也可以手动应用形状。

4.激光显微切割

接下来,在视觉控制下,由激光精确地确定定义的ROI,并通过重力直接收集。无接触切除有助于防止污染,例如RNases。此外,您可以使用"Move and Cut"没有任何预定义形状的工具。通过重力收集可以使用标准的,具有成本效益的 消耗品 例如PCR管或8条管盖。收集可直接在裂解缓冲液中进行或干燥。我们提供适当的 LMD 系统根据您的需求。

5. Extraction of RNA

徕卡微系统建议使用高质量的QIAGEN试剂盒(RNeasy®Micro Kit)来制备核酸。

它们可以立即用于下游应用中,例如PCR,测序,定量,实时PCR,或者可以存储在–20°C下直至需要。

请参阅 www.qiagen.com 有关详细信息。

6. RNA analysis

RNA分析通常通过qPCR进行。特别 LMD 协议将确保 RNA质量 保持不变。

微阵列或下一代测序(NGS)等技术也适用。

感谢 LMD 降低切割精度只会得到您感兴趣的细胞的结果。这使您能够可靠地比较不同江苏体彩区域的基因表达结果。

典型研究领域

  • 阿尔茨海默氏病
  • 发展生物学
  • 老化
  • 肿瘤江苏体彩的突变分析
  • 其他疾病

参考文献

  1. Duda等。激光捕获显微切割(2018)335-360页
  2. Lee等。 CellRep(2017)
  3. 格林等。 PNAS(2017)
  4. Ortner等。 NerobioDis(2017)