单细胞精度的RNA分析工作流程
徕卡的激光显微解剖系统将仅精确切割您感兴趣的细胞,从而改善您的工作流程。一切都在视觉控制下,不会被周围江苏体彩污染。
RNA分析工作流程-步骤

1.样品制备

通常,基于特殊膜的载片用于激光显微切割。样品制备 LMD 很简单,可以从经典的江苏体彩学准备中得出。
石蜡包埋将江苏体彩样本带入可以切成薄片的结构。或者,您可以使用冷冻切片来准备幻灯片。用于RNA分析的江苏体彩通常是速冻的,例如在液氮中并随后冷冻切片。
我们将提供 适用的LMD滑轨 为您的应用程序。

2.固色和染色

甲酚紫染色通常用于神经元江苏体彩。它是一种基本染色剂,可与神经细胞质的酸性分子结合,例如富含RNA的核糖体。
甲酚紫永久性地染色切片,并且适用于石蜡切片和冷冻切片以及随后的RNA制备。
除了甲酚紫之外,还可以使用其他污渍(例如甲苯胺蓝)。

3.可视化和投资回报率

徕卡 LMD 系统可以为您生成自动样本概览,可用于轻松导航到您感兴趣的区域(ROI)。
您的投资回报率多巴胺能神经元可以通过AVC软件模块自动识别和标记,也可以手动应用形状。

4.激光显微切割

接下来,在视觉控制下,由激光精确地确定定义的ROI,并通过重力直接收集。无接触切除有助于防止污染,例如RNases。此外,您可以使用"Move and Cut"没有任何预定义形状的工具。通过重力收集可以使用标准的,具有成本效益的 消耗品 例如PCR管或8条管盖。收集可直接在裂解缓冲液中进行或干燥。我们提供适当的 LMD 系统根据您的需求。

5. Extraction of RNA

徕卡微系统建议使用高质量的QIAGEN试剂盒(RNeasy®Micro Kit)来制备核酸。
它们可以立即用于下游应用中,例如PCR,测序,定量,实时PCR,或者可以存储在–20°C下直至需要。
请参阅 www.qiagen.com 有关详细信息。

6. RNA analysis

RNA分析通常通过qPCR进行。特别 LMD 协议将确保 RNA质量 保持不变。
微阵列或下一代测序(NGS)等技术也适用。
感谢 LMD 降低切割精度只会得到您感兴趣的细胞的结果。这使您能够可靠地比较不同江苏体彩区域的基因表达结果。

典型研究领域
- 阿尔茨海默氏病
- 发展生物学
- 老化
- 肿瘤江苏体彩的突变分析
- 其他疾病
更多的信息
- 激光显微切割 传单– RNA分析 (pdf)
- 激光显微切割应用视频
- 方案–用于RNA纯化的单细胞激光显微切割
- 激光显微切割文章& tutorials 在科学实验室
- 徕卡激光显微切割(LMD)
参考文献
- Duda等。激光捕获显微切割(2018)335-360页
- Lee等。 CellRep(2017)
- 格林等。 PNAS(2017)
- Ortner等。 NerobioDis(2017)