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改善低温电子断层扫描工作流程

以3D亚纳米分辨率显示细胞机制

徕卡显微系统公司和赛默飞世尔科技公司合作开发了完全集成的低温电子断层扫描工作流程。它可以确保玻璃化与我们的产品完全整合 电磁 通过THUNDER Imager进行预选的GP2 电磁 低温 CLEM 科学的Krios™G3i冷冻机进行3D图像重建 透射电镜。所有仪器之间的无缝通信确保了可靠的结果和可重复的实验。

受益于安全的样品和数据传输以及细胞靶区域的轻松检索。为了进一步优化样品制备过程,请在工作流程开始时添加PRIMO,以控制细胞在细胞表面的扩散和位置。 电磁 格。研究其亚细胞环境中的复杂生物学机制,并借助THUNDER技术获得亚纳米分辨率的图像。

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低温电子断层扫描工作流程

步骤1:使用PRIMO进行微图案化

通过使用微模式系统PRIMO克服了冷冻-ET样品制备过程中的第一个挑战,该系统可控制细胞粘附,扩散和形状 电磁 网格。它能够精确定位细胞并优化细胞扩散,同时保留细胞表面。 电磁 网格未损坏。该软件会自动在您的网格内对齐图案 电磁 网格,确保您的细胞处于最佳位置以进行进一步处理。

了解有关PRIMO的更多信息: //www.alveolelab.com/our-products/primo-micropatterning/

步骤2:玻璃化

在冷冻之前,将样品保持在湿度受控的环境室内并保持稳定的温度。

然后通过自动浸入式冷冻机的浸入式冷冻将样品玻璃化 电磁 GP2。玻璃化过程抑制了冰晶的形成,从而确保了细胞含量尽可能接近天然状态。

Step 3: Selection

为了实现高效的工作流程,必须预先选择合适的单元格和目标区域。这是通过使用低温显微镜来实现的 THUNDER Imager 电磁 低温 CLEM。然后可以将样品转移到Thermo Scientific™Aquilos™进行研磨。仪器之间的完全连接意味着安全,准确地传输了定义的区域和坐标,以使Aquilos立即重新定位。无需花费时间寻找相关的目标职位!

为避免珍贵标本受到污染,集成低温层析成像工作流程可确保在所涉及的系统之间安全地传输样品。专用盒系统可在整个工作流程中保护您的样品,为您获得可靠的科学结果提供坚实的基础。

(Thermo Scientific,Krios和Aquilos是Thermo Fisher Scientific的商标。)

Step 4: Milling

在THUNDER Imager中进行预选和定位后 电磁 低温 CLEM,样品被转移到 的rmo Scientific天鹰座,专用的Cryo DualBeam电子显微镜。

过去,无法以亚纳米分辨率分辨细胞内部,因为许多样品太厚而无法通过冷冻电子断层扫描成像。

Aquilos通过使用扫描电子束克服了厚度限制(扫描电镜)和聚焦的离子束(FIB)。电子束用于成像时,镓离子束可确保玻璃化细胞的精确研磨。

通过研磨过程,形成了薄的冰盖,即网格状薄片,然后可以使用电子断层扫描对其进行检查。

 

步骤5:3D冷冻层析成像

电磁 网格(包括网格上的薄片)被从天鹰座转移到 的rmo Scientific Krios™G3i (Cryo 透射电镜)。

低温 透射电镜 通过逐渐倾斜样品,可以从不同角度对感兴趣区域进行多次成像。

通过计算对齐并重建单个图像,以从薄片及其亚纳米分辨率的内容生成三维断层图。