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借助3D STED深度纳米技术改善肾脏研究的工作流程

使用最佳的荧光标记,在透明组织中以纳米级显示细节。调查肾脏疾病的主要参与者。

结合深层纳米显微镜和光学清除功能,您现在可以从肾脏组织中成像肾小球滤过屏障的超微结构。徕卡 TCS SP8 STED 3倍(模拟发射损耗)纳米显微镜以前所未有的三维细节为样本内部的细节提供了照明。使用 STED 白色甘油物镜,在深于150 µm的透明组织中进行3D纳米显微镜检查,为了解肾脏疾病提供了新的见识。

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肾脏亚结构的变化揭示了肾脏病变

肾小球滤过屏障中的足细胞层在肾脏疾病中起重要作用。足细胞结构的改变与肾衰竭的发作有关。因此,以高分辨率对这一层进行成像的能力是识别健康和不健康组织的关键。

足细胞层的大小需要成像技术,其分辨率远低于衍射极限。这通常已通过电子显微镜技术解决,要求复杂的样品制备方案,并且缺少三维信息。

3D STED 深部纳米显微镜为肾脏研究打开了新的大门。 3D组合 STED 徕卡显微镜 TCS SP8 STED 3X和光学清除功能可在光学显微镜中以前所未有的三维细节对肾脏成像,并具有蛋白质特异性。

通过3D STED Deep Nanoscopy可视化肾小球滤过屏障的超微结构

甚至在组织内深度超过150 µm的情况下,这种样品的超微结构特征也可以通过新型扫描仪获得动力。 STED 白色甘油物镜。这不仅可以在23°C的温度下实现,而且可以在37°C的活细胞成像条件下以300 µm的舒适工作距离实现。

不用理会物理切片的麻烦。享受光谱自由度,并跟上不断增长的荧光生物标志物调色板。

站在临床研究的最前沿。

3D STED深度纳米技术工作流程

对于肾脏清除样品

纳米显微镜 TCS SP8 STED 配备HC PL的系统 APO 93X / 1.30 GLYC motCORR – STED 白色物镜可深入了解健康和患病组织的超微结构。

订购协议

下载传单"3D STED深度纳米技术工作流程"

1.样品制备

第一步是在水凝胶的帮助下解剖肾脏并稳定其结构和生物分子含量。因此它是 在4°C的丙烯酰胺基凝胶中孵育至 允许凝胶渗透到组织中。为了聚合,将温度移至37℃。

2.切片

在水凝胶中稳定后,使用震动刀将肾脏切成厚度最大为500 µm的切片。  

3.清算

光学清除有助于使厚的生物样品透明,因此可以进行深层成像。此外,清除会增加抗体的渗透深度和染色质量。为了获得最佳的清除效果,将肾脏切片转移至清除液中,并在50°C下孵育几天。

4.荧光免疫标记

标准的免疫标记方案可在清除的样品中提供出色的信噪比。的 一抗和二抗 孵育一整天,以有效地渗透到厚样品中。

5.安装

由于不匹配导致发生光散射 渗透介质中的折射指数(RI)。因此,在安装步骤中,必须考虑样品的RI和安装介质。固定组织的RI为1.45左右,水的RI为1.33,果糖溶液与固定组织的RI相匹配。因此,将样品安装在果糖中以匹配折射率,从而可以实现高穿透深度的成像。

6.纳米显微镜

样品准备好在 TCS SP8 STED 3倍以高分辨率和深度对肾小球滤过屏障的3D超微结构成像。使用HC PL APO 93X / 1.30 GLYC motCORR – STED 白色物镜,可以进行深度超过100 µm的纳米检查。 

7.可视化

显示您的3D STED 结果与 LAS X 3D可视化工具–简单明了。

其他研究领域

  • 神经科学
  • 病理
  • 肾脏疾病
  • 肾小球病变
  • 临床研究
  • 病理学研究
  • 药物研究

进一步阅读

Blom等。,化学。修订版,2017年。受激发射损耗显微镜。

Randles等。,科学。报告,2016年。三维电子显微镜揭示了肾小球屏障损伤的演变。

Unnersjö-Jess等。,肾脏国际,2015年:在光学透明的肾脏组织中裂隙隔膜蛋白的超高分辨率激发发射损耗成像