在线联系我们
乳腺发育
乳腺发育
文章

研究激素信号通路对乳腺发育和乳腺癌发作的影响

在她们的一生中,八分之一的女性会患乳腺癌。患乳腺癌的风险(乳腺癌致癌作用)随着女性年龄的增长而增加,并且与其生殖史有关。对于30岁之前生育孩子的女性,发生乳癌的机会较少。但是,现在知道,患乳腺癌的风险还取决于女性经历血清孕酮水平升高的次数,关于第一次怀孕之前的月经周期。女性荷尔蒙雌激素,孕酮(称为孕激素)和催乳素可控制乳房发育,并且在乳癌的发生中也具有重要作用。不幸的是,这些激素和其他信号蛋白在致癌作用中的潜在作用机理仍知之甚少。在此,最近发现了关于孕酮及其下游信号蛋白Wnt4如何促进乳腺发育,控制乳腺干细胞功能的机理的最新发现。发生在乳房(乳腺)中的黄体酮/ WNT4信号通路可能为与月经期间血清黄体酮峰值频率,口服避孕药方法和激素联合治疗相关的促癌作用提供了解释。

乳腺发育

作者

主题 & 标签

Introduction

为了克服乳腺癌并防止其发作(乳癌),至关重要的是更好地了解乳腺癌的生物学机制。众所周知,乳腺癌致癌的风险取决于女性的年龄和生殖史 [1]。但是,最近发现与月经周期有关的血清孕酮水平反复出现峰值也是导致乳腺癌致癌的重要危险因素。 [23]。通常,在女性的月经周期中(大多数女性为3-5周),在该周期的前1.5–2周(卵泡期)血清孕酮水平较低,随着排卵而开始增加,并在几天内达到峰值之后(黄体期),然后在周期结束时逐渐下降至低值(图1) [4]。如果妇女的月经周期少于3周,或者如果她不怀孕,则在月经周期的最后1.5–2周之外血清孕酮水平升高,则认为这是异常的 [45]。

图1:妇女月经周期中的孕酮水平图 [4].

乳腺发育

为了更详细地研究乳房发育机制,通常将小鼠用作模型生物。小鼠乳腺和人类乳房之间在解剖学,组织学和荷尔蒙方面具有明显的相似性,这证明使用小鼠作为模型生物 [6]。此外,还有实际原因:老鼠的乳腺适合于 体内体外 在发育生物学和癌症研究中使用的各种操作和技术,该动物的生命周期很短。

乳腺发育发生在多个阶段(图 2) [6]。在出生时,仅存在基本的乳管树。激素诱导乳腺上皮之间的通讯 [7] 和间质 [8] 细胞并调节其发育。在青春期,这种调节导致乳腺末端芽(TEB)上皮细胞增殖。这些细胞长成间充质层,最终到达脂肪垫,此时它们开始形成2nd 和 3rd 度分支。

图2:产后小鼠乳腺发育的示意图,显示了各个阶段:青春期;发情(女性性接受);怀孕;泌乳(乳汁分泌);和内卷(牛奶分泌停止)。

乳腺导管由内腔上皮层和外肌上皮层组成。两种主要的卵巢激素,即17-β-雌二醇(E2,雌激素家族) [9] 和黄体酮(P) [10]参与产后(出生后)乳腺发育。还已知这些激素是乳腺癌致癌因素。这些激素对乳房发育的信号通过核受体发生 [11],雌激素受体α(ERα)和 孕酮受体(PR)分别在腔的上皮细胞子集中表达 [12] 层。

在CD24阳性的乳腺上皮细胞中 [13],表面整合素β1(CD29)高表面表达的人群你好[14] 或整联蛋白α6(CD49f你好[14] 能够更经常地在乳腺脂肪垫上产生新的乳腺导管,并通过外科手术将其移除。这些上皮细胞被认为是双能乳腺干细胞 [15] 产生管腔和基底/肌上皮 [16] 细胞 [17]。但是,这些双能干细胞对激素的响应急剧增长的相关性受到谱系追踪实验的质疑,谱系追踪实验表明,产后乳腺的发育很大程度上受管腔和基底/肌上皮谱系限制的干细胞驱动。

事实仍然是,大多数细胞增殖发生在腔腔中,大多数乳腺癌是由腔和/或腔祖细胞引起的 [18] 细胞。月经周期反复接触血清孕酮水平升高与乳腺癌致癌风险增加有关。这一发现引出了一个问题,即孕酮对完整组织中的乳腺干细胞功能有多重要,以及它使用哪种信号通路影响各种类型的干细胞。

孕酮/ WNT4信号通路参与乳腺发育和再生

已经证明,乳腺上皮组织可以连续移植到清除的乳腺脂肪垫上长达七代。 [17]。作为测定 [19],嫁接的上皮及其相关的细胞外基质(ECM)保留了上皮结构 [8],成纤维细胞 [8]和免疫细胞。目前,乳腺上皮组织的手术植入(串行移植)是全面检测各种类型的干细胞和祖细胞再生乳腺组织能力的唯一方法。该测定已与不同的遗传突变株组合,以定义孕酮信号传导及其下游介体Wnt4和RANKL的相对贡献 [20] 确定乳腺上皮细胞的再生潜力。

此处报道的结果解决了有关卵巢激素孕酮和信号蛋白Wnt4可能对乳腺癌致癌机制影响的最新发现。

Methods

老鼠

所有小鼠均按照瑞士动物安全指南进行维护和处理。所有动物实验均获得瑞士沃州道德兽医委员会的批准。进行这项研究的小鼠具有混合的遗传背景(小鼠品系129SV和C57BL6) [17].

图像分析和染色

表达EGFP的乳腺导管增生 [21] (用于系列移植)或dTomato [21] 通过荧光立体显微镜观察 [17]。整个乳腺固定和X-gal或胭脂红明矾染色后,使用Leica采集图像 MZ FLIII, 徕卡M205FA, 要么 徕卡 MZ16F 荧光体视显微镜。使用axiovison rel 4.7软件定量乳腺填充的脂肪垫的面积。为了进行免疫染色,将乳腺固定在低聚甲醛中并包埋在石蜡中。第5节 切成μm厚,进行免疫组织化学或免疫荧光染色 [17]。图像是通过 徕卡 DM2000 或蔡司 Axioplan荧光复合显微镜。

RNA的分离和半定量qPCR

将乳腺在TRIzol®(Invitrogen)中匀浆 [17]。总RNA [22] 使用RNeasy(Quiagen)从片段中分离得到。基因 [23] 使用随机p(dN)合成 6 底漆 [24] 和MMLV逆转录酶 [25]。半定量实时PCR(qPCR) [26] 使用一系列引物序列进行三次重复分析 [17].

统计数据分析

使用2尾配对学生t检验方法比较数据集,以确定显着差异 [17]。对于每个数据集,均报告了平均值和标准偏差(σ,SD)值。通过Wilcoxon符号等级检验,比较了对侧生长产物中每一代脂肪垫填充的百分比程度。一个p值< 0.05表示数据集之间在统计学上有显着差异。

Results

孕酮受体(PR),RANKL和Wnt4在乳腺上皮更新中的作用

为了评估PR,RANKL和Wnt4信号在乳腺干细胞控制中的作用,从以下小鼠同窝出生的小鼠中连续植入完整的乳腺上皮:

  1. PR:野生型 [27] (WT;纯合子 [28] PR阳性,PR+ / +)和突变体 [27] (MT;纯合PR阴性,PR/ –);
  2. RANKL:野生型(RANKL+ / +)和突变体(RANKL/ –);和
  3. WNT4:野生型(Wnt4+ / +)和突变体(Wnt4/ – or WNT4+ / –)。

将完整的上皮碎片移植到对侧(并排)乳腺脂肪垫中。通过手术清除了脂肪垫的内源性上皮(图 3A)。 WNT4/ – 小鼠出生后不久就死亡,为了克服这个问题,移植了从小鼠胚胎第12.5 / 13.5天收获的乳腺上皮芽。为了容易地将植入的细胞与手术后可能会无意留下的内源性上皮区分开来,表达EGFP的供体 [21] 被使用。在8-12周后确定植入的乳腺的长出程度。对侧PR导致的乳腺增生/ –,RANKL/ –,  Wnt4/ –, WNT4+ / –和WT(+ / +)解剖并重新移植(图 3A).

不出所料+ / + 上皮细胞在4个连续移植世代中完全重建了大多数脂肪垫,但是PR/ – 上皮细胞不再由3重组乳腺rd 周期(图 3B). The RANKL+ / + 上皮细胞在4个以上的宿主中也完全重建了脂肪垫 代移植 3C). RANKL/ – 上皮细胞具有与RANKL相同的再生能力+ / + 一个显着的差异是MT移植物产生的侧枝更少 [17]。乳腺增生 from the WNT4+ / + 和 Wnt4+ / 乳芽在3个周期内将乳腺重构为与源自产后乳腺的WT上皮细胞相同的程度(图3D)。但是,Wnt4/ – 上皮细胞仅在1的脂肪垫中占50%ST 循环只有10 % by the 3rd 周期。 WNT4可以大大减少脂肪垫的重构/ – 上皮移植物比PR/ – 移植物(对侧对照之间的比较,图 3E)。该结果表明Wnt4在乳腺干细胞功能中具有重要作用,并且PR不排他地控制Wnt4的表达。 RANKL似乎对乳腺干细胞功能没有必要的控制 [17].

下面的方框图(图 3E)显示了WT和MT对侧移植物脂肪垫重构百分比的差异(%来自WT –%来自MT; MT表示为敲除 [29] {KO})。

图3A:乳腺发育研究的实验方案。从野生型(WT)或突变型(MT)供体小鼠切下的乳腺组织片段被移植到受体小鼠的对侧乳腺脂肪垫上,该受体的内源性上皮细胞已通过外科手术切除。 8-12周后通过荧光体视显微镜评估移植的腺体。然后解剖新的上皮碎片以进行连续植入。

图3B:PR的系列移植+ / + 和公关– / – 乳腺上皮细胞。 3的荧光立体显微照片rd 8周大的PR导致的一代乳腺增生+ / +; EGFP和PR– / –; EGFP供体小鼠。比例尺= 200 μm.

图3C:RANKL的系列移植+ / + 和RANKL– / – 乳腺上皮细胞。 3的荧光立体显微照片rd 5周大的RANKL产生的乳腺产物+ / +; EGFP和RANKL– / –; EGFP供体小鼠。插图:较高的放大倍数,显示WTKL控件中存在侧枝(箭头),而RANKL不存在– / –; EGFP上皮。比例尺= 200 μm.

图3D:Wnt4的串行移植+ / + 和 WNT4– / – 乳腺上皮细胞。 3的荧光立体显微照片rd WNT4的乳芽衍生的一代乳腺生长产物+ / +; EGFP和Wnt4– / –; EGFP胚胎。比例尺= 200 μm.

图3E:箱形图显示了在每一代移植中,野生型(WT)和突变型(KO或MT)对侧移植物(WT – KO)之间脂肪垫填充(重构)百分比的差异。 p值由Mann-Whitney U检验确定。

孕酮和雌激素在Wnt4表达中的作用

以上部分提到的结果表明,Wnt4以比PR信号传导更重要的方式影响乳腺再生潜能,表明Wnt4可能具有独立于PR的干细胞刺激功能。

小鼠乳腺 (Wnt4 :: EGFP) 有WT,ERα/ –和PR/ – 通过荧光立体显微镜分析遗传背景。使用红色荧光标记dTomato比较了导管的生长。 ERα和PR缺失均未改变 WNT4::EGFP 表示围产期的表达 [30] WNT4表达在很大程度上独立于ERα和PR信号传导 [17].

为了确定2种主要卵巢激素的作用,黄体酮(P)和E2(雌激素家族的17-β-雌二醇 [9]),在Wnt4表达中,测试了从青春期(6周龄)和成年(11周龄)小鼠的乳腺中新鲜分离的第一批富含上皮的类器官,测试了孕酮和E2诱导的Wnt4 mRNA [31]的表达。孕酮暴露会使Wnt4 mRNA表达增加约9倍,而成年小鼠则增加5倍,而E2引起青春期小鼠中Wnt4 mRNA的表达仅增加约2倍(图 4A)。为了评估PR信号对于青春期Wnt4表达的生理重要性, WNT4::绿色荧光蛋白 源自PR的上皮/ – 或PR+ / + (WT)供体被移植到对侧的清除脂肪垫上。当受体处于青春期阶段时,分析植入的腺体。荧光立体显微镜(dTomato)数据显示非重组细胞,证实PR中存在导管增生/ – 和公关+ / + 移植物(图 4B–C)。 PR中很容易检测到EGFP表达+ / + 嫁接(图 4D),但PR中不存在/不存在/ – 移植物(图 4E)。在PR上进行双重(dTomato和EGFP)荧光立体显微镜+ / + 对照移植物显示TEB中存在EGFP(图 4F,H)。在对侧公关/ – 移植物,在生长的起点观察到一些EGFP表达(图 4G)。这些结果表明青春期Wnt4表达是由PR信号介导的 [17].

图4:A)柱状图,显示了来自青春期和成年小鼠的乳突动物类中相对Wnt4 mRNA表达的标准化值; C是媒介物对照,E2是17-β-雌二醇暴露,P是孕酮暴露。误差线代表平均值±σ(SD)。 B–H)植入了对侧乳腺的表面荧光立体显微照片 WNT4::绿色荧光蛋白 上皮:PR+ / + (B,D,F,H)或PR/ – (C,E,G)。 dTomato表达(B,C);对侧植入腺体上的EGFP表达(D,E)加倍(dTomato和EGFP)表荧光(F,G,H)。箭头指向TEB(F,H)或原发性乳腺增生(G)的中央生长节点/部位。比例尺= 5 mm (B–G), 1 mm (H).

Wnt信号传导激活乳腺肌上皮细胞

肌上皮β-半乳糖苷酶的峰值 [32] 妊娠中期活动提示血清孕酮水平和Wnt4表达可能诱导经典Wnt信号的激活 [33]。孕酮低发情期间的乳腺分析 [34] β-半乳糖苷酶活性较低(图 5A)和更低的Wnt4和Axin2 [35] mRNA水平(图 5B)高于孕激素-高雌激素期的分析 [34]。为了确定黄体酮信号传导是否诱导经典的Wnt信号传导,将其去卵巢(去除卵巢) Axin2 :: LacZ [36] 用媒介物,单独的E2和E2处理雌性,以恢复PR表达和孕酮(E + P)。 E + P组合刺激了β-半乳糖苷酶活性所证明的Axin2转录,但单独的媒介物或E2却没有刺激Axin2转录(图 5C)。因此,孕酮刺激导致Axin2的转录增加。多个Wnt,其中一些是由乳腺基质细胞分泌的,已经参与了经典Wnt信号激活 [17]。为了评估规范的Wnt信号传导是否需要Wnt4表达, Axin2 :: LacZ WNT4中产生的转基因小鼠/ – 背景被利用。 8次后很容易检测到β-半乳糖苷酶活性 Wnt4的怀孕天数+ / + 小鼠的乳腺芽移植的移植物。 Axin2 :: LacZ+ 胚胎,但在对侧Wnt4中被取消/ –Axin2 :: LacZ+ 乳芽产生生长(图 5D)。同样,PR中经典的Wnt信号激活被减弱+ / 并废除了公关/ – 上皮细胞(图 5E),表明PR和Wnt4都是肌上皮中典型Wnt信号激活所必需的。

图5:A)X-gal的代表性整体立体显微镜图 [36] (蓝色)和胭脂红明矾(洋红色)染色的乳腺活检 Axin2 :: LacZ 发情和发情中的雌性小鼠。 B) 通过标准化的半定量qRT-PCR评估发情小鼠与发情小鼠的乳腺中发情/发情相对Wnt4和Axin2 mRNA表达的比率。蓝线代表平均值。 C) 卵巢切除后X-gal和胭脂红明矾染色的乳腺的立体显微照片 Axin2 :: LacZ 女性:治疗72 对照组(左),17-β-雌二醇(E2)(中),E2和孕酮(P)(右)的治疗小时。 D–E) 对侧腺体固定和X-gal的立体显微照片"stained"植入了来自 Axin2 :: LacZ 转基因小鼠和Wnt4+ / + or WNT4/ – 雌性胚胎(D)或 Axin2 :: LacZ 转基因小鼠和PR+ / 或PR/ – 雌性小鼠(E)。 8–9之后 怀孕的几天,很容易在PR中检测到反映Axin2转录的β-半乳糖苷酶表达+ / 和 WNT4+ / + 乳腺上皮,但不在PR中/ – 和 WNT4/ – 同行。蓝色是X-gal染色,洋红色是胭脂红明矾染色。所有比例尺= 200 μm.

Discussion

这项研究的结果表明,早期(围产期 [30])Wnt4表达在功能上很重要 [17]。进一步的结果表明,肌上皮中的经典Wnt信号传导需要PR和Wnt4,而在胚胎乳芽和末端芽周围的基质中观察到的经典Wnt信号传导活动与Wnt4无关。 [17]。此外,数据显示Wnt4是干细胞功能对产后乳腺发育的关键控制因素,它与孕激素一起在围产期和青春期发育中具有新作用。

尽管以前的激素刺激实验表明雌激素可诱导Wnt4表达,但这项研究发现PR信号的遗传缺失在青春期完全废除了Wnt4表达[17]。尽管如此,这两种卵巢激素仍在Wnt4控制中交织在一起,ERα信号间接充当PR表达的上游调节剂(图 6A) [17].

研究表明,RANKL对于干细胞潜能并不重要,这与先前基于解离细胞测定的结果相矛盾 [17]。与其中注射一定数量细胞的基于单细胞的测定相比,完整的上皮片段的移植不能确定具有再生潜力的细胞比例。然而,与解离的细胞不同,该方法可以对生理组织环境中完整的再生潜力进行半定量评估。实际上,众所周知,完整的微环境对干细胞功能很重要。

PR +腔细胞分泌Wnt4时经典Wnt信号的激活表明肌上皮/基底细胞是控制不同类型干细胞的微环境的核心组成部分(图 6B) [17]。肌上皮/基底细胞最终处于孕酮和Wnt4的控制之下,因此,干细胞活性与生殖需求有关。

研究还发现肌上皮/基底细胞是Wnt4的主要靶标 [17]。已知Wnt1是致癌基因 [37] 在小鼠的乳腺中,Wnt信号是其发展的关键。然而,在乳腺癌中未发现细胞内Wnt信号传导成分的突变。肌上皮细胞中的Wnt信号激活可能通过基因表达变化间接促进肿瘤发生,所述基因表达变化诱导刺激信号的分泌和/或细胞外基质的调节,从而导致管腔祖细胞的激活。存在Won4刺激的肌上皮细胞,具有现有致癌突变的发光祖细胞可以进一步扩增(图 6C) [17]。同时,Wnt4作用于双能乳腺干细胞以增加其数量。结果,管腔祖细胞被扩增,与分化程度更高的管腔上皮细胞相比,管腔祖细胞也更易于致癌。

图6:A)在乳腺发育过程中Wnt4表达的模型。腺体发育示意图(底部)和激素对乳腺干/祖细胞的控制(顶部)。 WNT4对于整个出生后发育中的干细胞活化很重要。在青春期和成年期,Wnt4表达需要PR信号传导。 ERα信号传导诱导PR表达。B) Wnt4在乳腺上皮中的作用模型。孕酮刺激PR +腔细胞(LC)中的Wnt4诱导。分泌的Wnt4作用于相邻的基底/肌上皮细胞(MC)。 WNT4激活肌上皮细胞中的经典Wnt信号传导,从而引起基因表达的变化。该信号导致导致ECM变化的因子的分泌 [8] 反过来会影响干细胞(SC),管腔受限干细胞(L-RSC)和基底受限干细胞(B-RSC)。 C) 孕酮和Wnt4在乳腺上皮中的致瘤作用模型。 PR信号传导下游的这种细胞间信号传导级联的重复激活可以通过扩大干细胞/祖细胞隔室以及具有致癌突变的管腔祖细胞来促进肿瘤发生。

Conclusions

已知黄体酮/ WNT4信号转导途径也在人乳房中起作用 [17]因此,这里报道的结果很可能对女性的乳癌发生有影响。孕酮/ WNT4途径的激活可能促进与以下因素相关的肿瘤发生作用:月经期间血清孕酮的峰值频率;口服避孕药;并与孕激素一起进行激素替代疗法。单独或与RANKL抑制剂一起使用的特定孕激素受体调节剂和Wnt抑制剂可有效预防或治疗乳腺癌。它们的使用可能特别有用,作为对罹患乳腺癌的高风险的绝经前妇女的预防策略。

References/Notes

  1. 乳腺癌:了解风险信息图表。美国疾病控制与预防中心癌症预防与控制处。
  2. 布里斯肯(Brisken)C:乳腺癌中的孕激素信号传导:一种被忽略的激素成为众人瞩目的焦点。自然评论巨蟹座13:385-96。 doi:10.1038 / nrc3518。
  3. Kuhl H,Schneider HPG:孕酮–乳腺癌的启动子或抑制剂。更冷剂16,增刊。 1(2013)。 doi:10.3109 / 13697137.2013.768806.
  4. HäggströmM:月经周期中的雌二醇,孕酮,促黄体生成激素和促卵泡激素的参考范围。 Wikiversity Journal of Medicine 1(2014)。 doi:10.15347 / wjm / 2014.001,ISSN:20018762。
  5. Walker HK,WD大厅和Hurst JW:Long WN:临床方法–历史,身体和实验室检查;在长WN:异常阴道出血,Ch。 173,第三版。Butterworths,波士顿(1990)。 ISBN-10:0-409-90077-X。
  6. Macias H,Hinck L:乳腺发育。威利跨学科研发版生物学1(4):533-57(2012)。 doi:10.1002 / wdev.35。
  7. 上皮细胞包括整个动物体内的腔组织以及血管和器官表面。上皮是四种基本动物组织之一。
  8. 间充质细胞缺乏极性(形状,结构和功能的空间差异),被大的细胞外基质(ECM;为周围细胞提供结构和生化支持的细胞外分子的集合)包围,并发展为结缔组织或组织淋巴和循环系统。成纤维细胞衍生自间充质细胞。成纤维细胞合成ECM和胶原蛋白,基质(组织结构框架),并参与组织愈合。
  9. 17-β-雌二醇,类固醇,是雌激素家族中最普遍的内源性激素。
  10. 孕激素,也称为pregn-4-ene-3,20-dione,类固醇,是一种内源性孕激素。
  11. 核受体是细胞内的一类蛋白质,专门用于检测类固醇和甲状腺激素以及某些其他分子。它们还可以与其他蛋白质一起调节与生物体的发育,体内平衡和代谢有关的基因表达。
  12. 发光源来自管腔,管状结构(如动脉或肠)的内部空间,或细胞成分(如内质网)。
  13. CD24是细胞粘附分子(凸轮),一种糖蛋白,在大多数B淋巴细胞(白细胞)的表面表达,并分化为神经母细胞(发育为神经元的细胞)。
  14. 整合素β1(CD29)和α6(CD49f)是整合素单元的蛋白质。整联蛋白是参与细胞粘附和识别的膜受体。
  15. 双能干细胞是未分化的细胞,可以分化为两种类型的特化细胞并繁殖以产生更多的干细胞。
  16. 肌上皮细胞通常在腺上皮中发现为基底膜上方的薄层,但通常位于腔细胞下方。
  17. Rajaram RD,Buric D,Caikoovski M,Ayyanan A,Rougemont J,Shan J,Vainio SJ,Yalcin-Ozuysal O和Brisken C:黄体酮和Wnt4通过肌上皮串扰控制乳腺干细胞。 EMBO在线(2015年1月20日)。 doi:10.15252 / embj.201490434。
  18. 祖细胞与干细胞相似,但只能分化成特定类型的细胞 干细胞可以无限复制,而祖细胞只能分裂有限的次数。
  19. 分析是一种分析程序,可以定性或定量地评估目标实体(通常称为分析物)的存在,数量或功能活性。
  20. RANKL代表核因子Kappa-B配体的受体激活剂,也称为TNFSF11(肿瘤坏死因子配体超家族成员11)和ODF(破骨细胞分化因子)。 RANKL是一种已知会影响免疫系统并控制骨骼再生的膜蛋白。
  21. EGFP代表增强型绿色荧光蛋白,一种被蓝光激发时发出绿色光的蛋白。在细胞和分子生物学中,EGFP基因经常用作蛋白质表达的标志。 dTomato是DsRed荧光蛋白的二聚体,当被绿光激发时会发出红色光。
  22. RNA代表核糖核酸,核糖核酸是一种聚合分子,参与基因的编码,解码,调节和表达。核酸RNA和DNA(脱氧核糖核酸)以及蛋白质和碳水化合物构成了生命必不可少的三个主要大分子。
  23. cDNA(互补DNA)是在逆转录酶催化的反应中从信使RNA(mRNA)模板合成的双链DNA。 cDNA还用于在通常不表达该蛋白的细胞中表达特定蛋白。
  24. 引物是短核酸序列(约10个碱基对)的链,可作为聚合酶链反应(PCR)方法中DNA合成的起点。
  25. MMLV(莫洛尼鼠白血病病毒)逆转录酶是一种RNA定向的DNA聚合酶。该酶可以使用RNA或单链DNA作为模板,从引物合成cDNA链。
  26. qPCR是指实时聚合酶链反应,一种用于扩增目标DNA分子的分子生物学技术。
  27. 野生型(WT)是指自然界中发现的物种典型形式的通常可观察到的特征或性状(表型)(无人工诱导的基因突变)。突变(MT)是指由突变产生的一种生物或新基因型(遗传特征),即该生物的基因DNA中的碱基对序列发生了变化。突变既可以自然发生,也可以人工诱导。
  28. 具有相同等位基因(同一基因的替代形式)的二倍体(染色体配对)生物称为纯合子,但是如果等位基因不同,则称为杂合子。
  29. 敲除(KO)是一种遗传技术,其中一种有机体的基因之一被设置为无活性,因此"knocked out".
  30. 围产期是指刚出生前后。
  31. Messenger RNA(mRNA)是一种核糖核酸分子,可将遗传信息从DNA传递到核糖体(核糖体是一种合成蛋白质的细胞器)。 mRNA指定了由基因表达产生的蛋白质产物的氨基酸序列。
  32. 半乳糖苷酶(糖苷水解酶)是将半乳糖苷(糖苷与半乳糖)水解为单糖(单糖)的酶催化剂。有α-半乳糖苷和β-半乳糖苷酶形式。
  33. Wnt蛋白信号传导途径共有3种:经典Wnt途径,非经典平面细胞极性途径和非经典Wnt /钙途径。
  34. 发情周期是指由于生殖激素而在哺乳动物雌性(生下活的,没有卵的)雌性动物中发生的反复生理变化。它是在性成熟期被动情期(由于季节变化和光照减少而导致性周期暂停)或怀孕中断后开始的。发情周期通常分为四个阶段:发情期(卵巢卵泡开始生长,雌激素引起子宫内膜[子宫内膜]发育),发情期(雌性接受或"in heat"),二头肌或睾丸(黄体活跃,并产生孕激素和雌激素)。
  35. Axin2是一种Axin蛋白,大概在调节b-catenin稳定性中起作用。 b-catenin蛋白是钙粘蛋白复合物的一个亚基,在Wnt信号通路中起细胞内信号转导的作用。
  36. lacZ基因(lacZα)和突变lacZ基因(lacZΔM15)的片段是互补的。当基因一起表达时,如同将含有lacZα的质粒转染到含有lacZΔM15的细胞中一样,会形成酶β-半乳糖苷酶。通过暴露于X-gal可以检测到活性β-半乳糖苷酶的存在,从而导致细胞呈蓝色。 X-gal是乳糖的类似物,可以被β-半乳糖苷酶水解。蓝/白筛选方法利用lacZα和lacZΔM15的互补作用以及β-半乳糖苷酶水解X-gal进行细胞鉴定。
  37. 癌基因是可以引起癌症发作的基因。肿瘤细胞通常具有高表达的癌基因。