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抽象

校准和缩放共焦显微镜中轴距作为折射率函数的方法

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3D共聚焦显微镜中的精确距离测量对于定量分析,体积可视化和图像恢复非常重要。但是,轴向距离可能会因点扩散函数(PSF)和样品与浸没液体之间的折射率不匹配而发生扭曲,这很难分开。此外,尽管存在几种高端方法,但在共聚焦显微镜中准确校准轴向距离仍然很麻烦。在本文中,我们介绍了两种在3D共聚焦显微镜中校准轴向距离的方法,这些方法既准确又易于实现。使用这些方法,我们测量了轴向缩放因子,作为高孔径共聚焦显微镜成像的折射率失配的函数。我们发现我们的缩放因子几乎完全取决于折射率,并且与将光的全部矢量特性都考虑在内的理论预测高度吻合。但是,使用(大角度)几何光学的理论预测存在很大的偏差,这些几何光学预测的缩放系数要低得多。作为说明,我们测量了正确校准的点扫描共聚焦显微镜的PSF,并显示由于该PSF,几乎与折射率匹配的微米大小的球形物体仍显着伸长,这表明在确定时使用此类粒子进行轴向校准或轴向缩放。

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阅读全文:

Besseling TH,Jose J,van Blaaderen A:
校准和缩放共焦显微镜中轴距作为折射率函数的方法

显微镜杂志257(2)142–150(2015),doi:10.1111 / jmi.12194