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抽象

激光捕获显微切割从小鼠脊髓运动神经元细胞体转录组分析的RNA的生产。

从目标细胞中制备高质量的RNA对于准确和有意义地分析健康和疾病或药物治疗后不同细胞类型或同一细胞类型之间的转录差异至关重要。在脊髓中,由运动神经元(许多神经系统疾病和神经退行性疾病的关注目标)制备的这种方法因以下事实而变得复杂:运动神经元代表<10 占细胞总数的百分比。激光捕获显微切割LMD)已开发出来以解决此问题。在这里,我们描述了一种协议,可以快速恢复,冷冻和切片小鼠脊髓以避免内源性和外源性RNase对RNA的损害,然后在70中用Azure B进行染色 %乙醇以识别运动神经元,同时保持内源性RNase被抑制。 LMD 然后将其用于直接将染色的神经元捕获到硫氰酸胍裂解缓冲液中,保持RNA完整性。使用标准技术来回收总RNA并测量其完整性。然后,该材料可用于通过RNA-seq和qRT-PCR进行转录本的下游分析。

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Bandyopadhyay U,Fenton WA,Horwich AL,Nagy,M:
通过激光捕获显微切割从小鼠脊髓运动神经元细胞体生产用于转录组学分析的RNA。 

J.Vis。经验83:e51168(2014),doi:10.3791 / 51168