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研究诱导性多能干江苏体彩(iPSC)衍生的自然杀伤(NK)江苏体彩

天然杀伤(NK)江苏体彩的研究为开发新型免疫疗法具有广阔的前景。诱导多能干江苏体彩(iPSC)衍生的NK江苏体彩可用于创建易于访问的标准化江苏体彩群。但是,当培养的江苏体彩形成厚层时,使用常规的基于相机的宽视场荧光显微镜成像时,可能会导致雾度和对比度的损失。在这里,已证明使用大容量计算清除(LVCC)的THUNDER Imager 3D江苏体彩培养可以在荧光标记的iPSC江苏体彩的厚层内部提供清晰,高对比度的可视化效果,从而可以清晰地显示高级3D江苏体彩培养检测结果。

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Introduction

所谓的“自然杀手”(NK)江苏体彩,也称为大颗粒淋巴江苏体彩(LGL),在免疫系统中起重要作用 [1,2]。它们可以迅速消灭病毒感染的恶性肿瘤 或压力大的单元格,以确保快速而具体的防御反应。 NK江苏体彩作为一种缓解疾病的治疗手段的研究,如免疫缺陷,受损的江苏体彩成熟和慢性疼痛等,已导致人们对NK江苏体彩分化和迁移的接触依赖性机制进行了研究。 [3]。这些研究通常涉及多维成像技术,包括宽场荧光,共聚焦和超分辨率显微镜。

NK江苏体彩可以衍生自诱导多能干江苏体彩(iPSC)。这些iPSC, 来自皮肤或血江苏体彩的蛋白质,可以重新编程为类胚胎多能状态,可以利用该状态提供治疗用途所需的任何类型的江苏体彩 [4]。最近,由于iPSC衍生的NK江苏体彩的重要优势,例如易于从可获取的来源生成,在扩增过程中保留多能性以及长期储存能力,其研究数量有所增加。 [3,5]。培养iPSC时,它们通常会形成较厚的层或“圆顶”。随后,荧光标记可用于鉴定江苏体彩内的特定蛋白质,以及鉴定和追踪江苏体彩。

挑战-研究厚江苏体彩层

要研究厚的江苏体彩层,使用显微镜是可行的 不仅可以在大面积样品上进行快速筛查,而且还可以在内部深处进行高倍率成像,并具有很好的对比度。基于相机的荧光显微镜可提供易用性,速度和检测灵敏度。然而,研究培养中的活江苏体彩多层存在几个重要的挑战。厚样品的成像通常会导致图像中出现典型的“雾度”,从而大大降低对比度。这种雾度是由检测到的荧光信号产生的,该荧光信号是从样品的失焦平面发出的。使用宽视野显微镜,也可能很难清晰地聚焦在厚样本内部的深处。另外, 浸入水性介质中的样品可能会发生折射率不匹配的现象。

Methods

配备了长工作距离消色差水物镜(FL PLAN,25x,0.95 NA)的THUNDER Imager 3D江苏体彩培养物用于对厚江苏体彩层内部进行成像。使用水浸物镜有助于校正江苏体彩和培养江苏体彩的水性介质之间的折射率不匹配。另外,长的工作距离使得能够在江苏体彩层内部深入聚焦。要清除图像,尤其是散焦信息, 大容量计算清算(LVCC),光电数字 Leica Microsystems开发的方法 [6],是在获取期间应用的。  此外,将背景减法和自适应反卷积应用于用于3D图像重建的z堆栈,以便可以更高的对比度和更清晰的细节观察亚江苏体彩结构。 [6].

Results

图1中显示了使用THUNDER Imager 3D Cell Culture记录的厚iPSC干江苏体彩层的图像。

Conclusions

结果表明  可以使用较厚的诱导多能干江苏体彩(iPSC)层来获取没有离焦模糊或混浊和散射光的图像 THUNDER Imager 3D江苏体彩培养和大容量计算清除(LVCC) [6]。背景减法和自适应反卷积的应用 [6] 允许iPSC江苏体彩显示荧光标记的粘附和 跨膜蛋白以及江苏体彩核中的染色质将以更高的对比度和更清晰的细节被观察到 整个Z堆栈用于3D图像重建。