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讲解

使用安装架进行DLS样品制备

光学片显微镜的样品制备

在光片显微镜技术中,样品处理通常是重要的主题。的 TCS SP8 DLS 将Light Sheet技术集成到倒置共焦平台中,因此可以利用有关样品安装和xy载物台功能的一般原理。在这里,我们描述了一组安装框架,这些安装框架允许在可能有害的安装介质(例如BABB(苄基酒精苄基苯甲酸酯))的情况下制备更多数量的样品。

图像:通过光片显微术扫描的一部分经ECi清除的肾脏中的3D肾小球。海德堡大学曼海姆医学院诺伯特·格雷茨教授提供 [1].

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Sample Holders

此处介绍的样品架是针对Digital LightSheet(DLS)成像,但也适合使用传统的立式和倒置显微镜成像。

Introduction

使用SP8成像 DLS 将模块放置在TwinFlect镜之间。
x方向上的移动范围受使用的TwinFlect反射镜的距离限制(2.5 mm,5 毫米或7.8毫米)。最大行程范围约为镜子之间距离的一半。

在y方向上,样品架(例如培养皿)的形状和大小决定了行程范围。

对于标准的35毫米皮氏培养皿(玻璃底盖玻片直径为20毫米),在y方向上只能进行很小的移动而不会接触到培养皿的边缘:

尤其是对于用于24 x 50 mm矩形盖玻片的样品架,y轴运动得到了增加,从而可以使用更大/更长的样品。 同样,对于多位置实验,可以放大在一个实验中成像的样本数量。

材料和方法

安装框架套件(#158007063)包括一个用于24 x 50 mm玻璃盖玻片的样品架和另一个用于直径30 mm的圆形盖玻片的样品架。请注意,不包括玻璃盖玻片。

24 x 50 mm盖玻片的样品架仅与以下z-Galvo载物台插件兼容:

  • 158004118可旋转刀片反向和
  • 158004119插入通用。

密封样品架/附上玻璃盖滑片

为了在水溶液中成像,可以使用有机硅(例如Elastosil®43,Wacker)或两组分twinsil®来连接玻璃盖玻片。

这些支架也适合在腐蚀性较强的溶液中成像,例如苄醇/苯甲酸苄酯(BABB)。由于BABB可以溶解许多材料,因此必须使用特殊类型的硅树脂来密封容器,例如Elastosil®E41(Wacker)(与德国维尔茨堡Rudolf Virchow Zentrum大学的JürgenPinnecker进行个人交流)。

  1. 在样品架底部凹槽的内边缘涂上硅酮/双硅硅油。
  2. 添加玻璃盖玻片,然后轻轻按压以确保其均匀放置,以确保所有位置均密封良好。
  3. 要检查腔室密封,请在样品架中加入一些蒸馏水,看看是否发生泄漏。

您可以在连接了玻璃盖玻片的情况下重复使用样品架。每次会话后都无需更换盖玻片。可以用酒精清洁。

装载样品

组装好带有相应玻璃盖玻片的安装框架后,您可以继续使用不同的样品安装选项:

基于琼脂糖的安装

  1. 用薄薄的琼脂糖填充盖玻片的表面( 0.5 – 1毫米)并等待其聚合,以便为您的样品创建垫片
  2. 将您的样品悬浮在液体琼脂糖(用于活体样品的低熔点琼脂糖)中,放在该层的顶部
  3. 对齐样品(理想情况下成一条线)以进行成像
  4. 从侧面去除多余的琼脂糖,以为镜子留出空间。

U型玻璃毛细管

请遵循《科学实验室》文章中所述的协议:

DLS样品制备:使用U形玻璃毛细管进行样品安装.

超级胶水,用于安装清除的组织

将较大(澄清)的样品直接粘贴到玻璃盖玻片上时,可与样品架一起使用。

通过光片显微镜检查在一部分经ECi清除的肾脏中3D肾小球的可视化。海德堡大学曼海姆医学院诺伯特·格雷茨教授提供